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導致ATCC細胞結(jié)團的主要原因解讀

發(fā)布時間: 2023-02-14  點擊次數(shù): 771次
   ATCC細胞在不加任何條件下直接凍存時,細胞內(nèi)和外環(huán)境中的水都會形成冰晶,能導致細胞內(nèi)發(fā)生機械損傷、電解質(zhì)升高、滲透壓改變、脫水、PH改變、蛋白變性等,能引起細胞死亡。如向培養(yǎng)液加入保護劑,可使冰點降低。在緩慢的凍結(jié)條件下,能使細胞內(nèi)水份在凍結(jié)前透出細胞。貯存在-130℃以下的低溫中能減少冰晶的形成。
  ATCC細胞可能由于各種原因相互附著并發(fā)生結(jié)團。細胞結(jié)團的常見的原因是在細胞裂解之后,培養(yǎng)基中存在游離DNA和細胞碎片,DNA的粘性使細胞和其他碎片聚集成大的團塊。以下是細胞裂解和DNA被釋放到培養(yǎng)基中的一些原因:
  1.消化過度:過度使用蛋白水解酶可能會導致細胞結(jié)團。
  2.環(huán)境應力:機械力、反復凍融循環(huán)和其他環(huán)境應力可加速細胞死亡,早期現(xiàn)象可能是細胞和細胞粘附。
  3.組織分解:通過化學、機械或酶法從初生組織制備單細胞懸浮液可能會導致一些細胞破裂。從組織制備單細胞懸浮液時,通常需要膠原酶消化細胞外基質(zhì)。
  4.過度生長:當細胞達到融合狀態(tài)時,細胞碎片和細胞裂解產(chǎn)生的游離DNA就會堆積過多。
  那么我們該如何預防細胞結(jié)團呢?細胞結(jié)團會減少細胞對關(guān)鍵營養(yǎng)素的獲取,從而阻礙整體細胞的生長。細胞結(jié)團還會影響需要清潔制備單個細胞的下游檢測,根據(jù)結(jié)團的根本原因,下找出合理的解決方案:
  1.細胞裂解與DNA釋放:DNaseⅠ可用于組織降解以及常規(guī)細胞培養(yǎng)過程中,以防止多種類型細胞的結(jié)團。
  注意:DNaseⅠ在二價離子(如Mg2+,Ca2+)存在時活性大。
  2.二價陽離子:檸檬酸鹽和EDTA等螯合劑可以用于去除細胞培養(yǎng)基中的鈣離子。也可使用無血清、無Ca2+/Mg2+平衡鹽溶液。
  3.細胞密度:細胞在傳代前,參考細胞系文獻或者已知的特性來獲取推薦的細胞密度。
  4.操作:在進行細胞分離時,應小心處理細胞并使用適當?shù)碾x心機設(shè)置。微小的結(jié)團可以通過攪碎,或者輕柔地上下吹打細胞來解決。
  5.支原體污染:處理掉被污染的細胞,消毒培養(yǎng)室和細胞培養(yǎng)箱。遵循良好的實驗室規(guī)范以避免污染。

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